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蜀科離心機分離植物細胞膜實驗方法

更新時間:2016-03-30      點擊次數(shù):2238

  蜀科離心機廣泛應用于農(nóng)業(yè)科學、生物工程、食品、化工、制藥、環(huán)保等科研和生產(chǎn)單位。今天給大家簡單介紹一個用蜀科離心機分離植物細胞膜的實驗供大家參考。我們選用的是蜀科的臺式高速大容量冷凍離心機。
*步,組織破碎,也可以用研磨的樣本。如果存在大量粗纖維的話,你還可以用紗布過濾一下。裂解液配方,0.55M 蔗糖;0.76M Tris; 0.02M EDTA; 0.03M 抗壞血酸。用Hcl 調整HP 到7.8。原料/裂解液 1:2。
第二步,研磨液分3次用蜀科低速冷凍離心機分離出那些不需要的組織殘渣或細胞器。 100G 10min ; 3000G 5min ; 17000G 15min。(速度不夠的話適當延長時間,否則懸浮液中會存在大量的線粒體之類的細胞器)。
第三步,上一步得到的懸浮液是含有總膜的懸浮液,一般情況下, 下一步應該利用高速離心20000G以上的離心力,把所有的膜沉淀出來進一步純化(這里好用蜀科高速離心機,推薦選用臺式高速大容量冷凍離心機,離心力如果不夠分離不出來,如果原料非常多的話可能會析出一些,你也可以試著改變下裂解液的蔗糖濃度,理論上密度變了以后沉降系數(shù)也會改變,不過這個要做大量的計算工作以確保不影響膜的純度)。純化有PEG/Dextran; 蔗糖梯度兩種方法, 蔗糖梯度比較老了,效果不是很好,但是蔗糖很便宜很好弄。我們用的是6.3%PEG/Dextran 。

   因為實驗中需要全程保持0-4度的溫度,所以選用的是蜀科的冷凍離心機,了解更多實驗室離心機操作方法,請收藏并繼續(xù)關注我們的。

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